
一、实验准备
hPSC诱导分化胰岛类器官试剂盒(abs90131-1kit)
二、诱导流程图
三、试剂盒使用流程:
①EB 形成(2 天)
1、hPSC 于基质胶包被的标准透明6孔板的一个孔,加入2mLAdvance 人多能干细胞培养基,使细胞生长至 70-80%汇合度。
2、将孔中的培养基吸除。
3、在消化期间配置EB形成完全培养基:取 11mL EB 形成培养基与 22μL EB 形成补充剂混匀获得 EB 形成完全培养基,于一个新的超低吸附 6孔板的 3 个孔每孔加入 2mL EB 形成完全培养基,准备后续使用。
展开剩余67%4、向孔中加入 1mL PBS(无钙镁离子)洗,吸去。
5、向孔中加入 1mL accutase,37℃消化 3min。
6、当看到克隆发白发亮,轻轻拍打板侧(每侧拍两下),把细胞拍下来,再在生物安全柜中,加入 1mL EB 形成完全培养基终止消化,把这 2mL 体系吸入装有 3mL EB 形成完全培养基的15mL 离心管离心 160g 5min,吸弃上清至剩余几十微升,轻弹管底 3-4 下,让细胞沉淀溶于上清。
7、往管里加 1mL EB 形成完全培养基,轻弹 3-4 下,混匀即可,把这1mL细胞悬液平均悬空加入提前准备的超低吸附 6孔板3 个孔中,37℃、5%CO2过夜。
8、第二天(D-1)镜下观察可以看到形成大量、均一的 EB,半数换液,补充 50
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